戈雷拉肽
简介药代动力学生物活性用途制备体外研究体内研究 专题
中文名称 | 戈雷拉肽 |
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中文同义词 | 戈雷拉肽;乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸;戈雷拉肽,THYMOSINΒ4(1-4) |
英文名称 | AC-SER-ASP-LYS-PRO-OH |
英文同义词 | SERASPENIDE;ACETYL-SER-ASP-LYS-PRO;AC-SDKP;AC-SDKP-DELTA;AC-SER-ASP-LYS-PRO;AC-SER-ASP-LYS-PRO-OH;AcSDKP Ac-Ser-Asp-Lys-Pro;REF DUPL: Ac-Ser-Asp-Lys-Pro-OH |
CAS号 | 127103-11-1 |
分子式 | C20H33N5O9 |
分子量 | 487.5 |
EINECS号 | |
相关类别 | 原料药;多肽-客户肽;多肽;肽类;标准品;目录多肽;Peptide;Angiotensins;Peptides for Cell Biology |
Mol文件 | 127103-11-1.mol |
结构式 |
戈雷拉肽 性质
沸点 | 992.0±65.0 °C(predicted) |
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密度 | 1.382±0.06 g/cm3(Temp: 20 °C; Press: 760 Torr)(predicted) |
储存条件 | −20°C |
溶解度 | 溶于二甲基亚砜 |
酸度系数(pKa) | 3.39±0.20(predicted) |
形态 | 固体 |
颜色 | 白色至类白色 |
水溶解性 | Soluble in water at 2mg/ml |
序列 | H-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-OH |
戈雷拉肽 用途与合成方法
简介
戈雷拉肽又叫N-乙酰基-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro),简 写为Ac-S-D-K-P,它是一个氮端乙酰化的内源性四肽,广泛分布于体内各种组织及体液中。这个四肽主要由它的前体物胸腺素β4经由脯氨酰寡肽酶(POP)水解而释放。在血液中的浓度一般为纳摩尔级。
药代动力学
戈雷拉肽的药代动力学研究发现,戈雷拉肽静脉注入体内后,很快就被降解,半衰期仅为4~5min。戈雷拉肽在人体内通过两种机制从血浆中清除:①血管紧张素转换酶(ACE)介导的水解作用;② 肾小球滤过作用。其中血管紧张素转换酶(ACE)介导的水解作用是戈雷拉肽代谢的主要途径。
生物活性
戈雷拉肽是一种多功能性生理调控因子,具有多种生物学活性。早期报道,戈雷拉肽可以通过阻止原始造血干细胞进入S期,使其静止在G0期,而抑制造血干细胞的活性。随后发现戈雷拉肽通过促进血管的生成可以提高表皮的再植能力,加速受损的无血管表皮移植的伤口愈合。戈雷拉肽能够抑制MGM刺激的骨髓 干细胞分化成巨噬细胞,从而起到抗炎作用。近来发现戈雷拉肽对多种细胞的增殖具有抑制作用。
用途
戈雷拉肽为多肽类有机物,可用作医药原料。
制备
1.肽树脂的合成
(1)制备Fmoc-Pro-树脂:
称取5克2-氯-三苯氯甲基树脂,用二氯甲烷(DCM)100ml浸泡60分钟,在上述的树脂中,加入DIEA 4.5ml,3.38g Fmoc-Pro-OH,25℃反应2小时,再加入封闭试剂甲醇1.5ml,25℃反应2小时,树脂用35ml异丙醇洗涤两次、再用35ml N,N-二甲基甲酰胺(DMF)洗两次,获得Fmoc-Pro-树脂;
(2)制备Fmoc-Lys(Boc)-OH树脂:
在步骤(1)的Fmoc-Pro-树脂中,加入35ml脱帽试剂,25℃反应10分钟,用真空泵抽干,重新加入35ml脱帽试剂25℃反应30分钟,抽干,用35ml异丙醇洗涤2 次,35mlDMF洗涤2次,重蒸馏的35mlDMF洗涤2次,取少量树脂加4ml茚三酮试剂, 沸水中加热3min,检测结果呈阳性。加入用重蒸馏的DMF溶解的4.69gFmoc-Lys(Boc) -OH、2mlDIEA、3.22gTBTU、5mlHOBt的混合物,22℃反应60分钟,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤2次,DMF洗涤2次,抽干,取少量树脂加4ml茚三酮试剂,沸水中加热3min,检测结果呈阴性。获得Fmoc-Lys(Boc)-Pro-树脂;
所述的脱帽试剂的组分和体积比为:PIP∶DMF=1∶2.5,下同;
(3)制备Fmoc-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂:
在步骤(2)的Fmoc-Lys(Boc)-Pro-树脂中,加入脱帽试剂脱帽两次,条件 同步骤(2);加入用重蒸馏的DMF溶解的4.12g Fmoc-D-Asp(otBu)-OH、2mlDIEA、3.22gTBTU、5mlHOBt的混合物,22℃反应60分钟,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤2 次,DMF洗涤2次,取少量树脂加4ml茚三酮试剂,沸水中加热3min,检测结果呈阴 性,抽干,取少量树脂加4ml茚三酮试剂,沸水中加热3min,检测结果呈阴性。获 得Fmoc-D-Asp(otBu)--Lys(Boc)-Pro-树脂;
其余操作以及工艺条件同上;
(4)制备Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂:
在步骤(3)的Fmoc-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂中,加入脱帽试剂脱帽两次,条件同步骤(2);加入用重蒸馏的DMF溶解的3.84g Fmoc-Ser(tBu)-OH、2mlDIEA、 3.22gTBTU、2mlHOBt的混合物,22℃反应60分钟,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤2 次,DMF洗涤2次,抽干,取少量树脂加4ml茚三酮试剂,沸水中加热3min,检测 结果呈阴性,获得Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂;
(5)制备Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)--Lys(Boc)-Pro-树脂(肽的乙酰化):
在步骤(4)的Fmoc-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂中,加入脱帽试剂脱帽两次,条件同步骤(2);加入6ml乙酸酐、50mlDCM、3mlDIEA的混合物,22℃反应60分钟,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤2次、DMF洗涤2次,甲醇洗3次,甲醇浸泡30-60分钟,抽干,用氮气吹干肽树脂成干颗粒,所得到的肽树脂为获得Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂;
2.肽树脂的切割分离
把吹干的Ac-Ser(tBu)-D-Asp(otBu)-Lys(Boc)-Pro-树脂倒入玻璃的切割瓶中,加入预冷至-20℃的切肽试剂(TFA∶H2O=95∶5,体积比)80ml,20℃反应1.5小时,过滤除去树脂,加-20℃的冰乙醚沉淀,离心收集沉淀物,用冷乙醚洗涤1次,低温冷冻干燥16小时,获得四肽异构体粗品2.1g;
3.对四肽异构体粗品的分离纯化
(1)样品准备:将四肽异构体粗品溶于水溶液中,过滤,备用。
(2)四肽异构体粗品HPLC分析:取滤液20μl用HPLC分析,色谱条件:C18色谱柱 (Hypersil-ODS2,Φ5um 4.6×250mm),流动相:A:0.1%三氟乙酸加99.9%水;B: 0.1%三氟乙酸加99.9%乙腈;梯度洗脱;流速为1ml/min;检测波长为:215nm;
(3)四肽异构体粗品HPLC纯化:
取滤液3ml用HPLC纯化,选用C18色谱柱(Hypersil-ODS2,Φ5um 10×250mm), 流动相:A:0.1%三氟乙酸加99.9%水;B:0.1%三氟乙酸加99.9%乙腈;梯度洗脱; 流速为10ml/min;检测波长为:215nm;收集目标峰液,样品峰合并后去盐,冻干, 获得四肽异构体纯品1.56g。
(4)四肽异构体纯品分析:
取少量样品,配成0.5mg/ml,过滤,取20μl用HPLC分析,条件同四肽异构体 粗品HPLC分析条件。
本实施例中,戈雷拉肽粗品的纯度为91.8670%,收率为 74.3%,纯度为98%(HPLC归一化法)。
体外研究
N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro is degraded specifically by ACE, and its plasma level rises substantially during ACE inhibitor therapy. Flow cytometry of rat cardiac fibroblasts treated with N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro shows significant inhibition of the progression of cells from G0/G1 phase to S phase of the cell cycle. Moreover, phosphorylation and nuclear translocation of Smad2 is decreased in cardiac fibroblasts treated with N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro. N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline appears to exert this function by blocking the action of a stem cell-specific proliferation stimulator and acts selectively on quiescent progenitors. N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro inhibits collagenase expression and activation is associated with increased expression of TIMP-1 and TIMP-2. N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro normalizes the IL-1β-mediated increase in MMP-2 and MMP-9 activities and MMP-13 expression.
体内研究
N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro prevents hypertension-induced inflammatory cell infiltration, collagen deposition, nephrin downregulation and albuminuria, which could lead to renoprotection in hypertensive mice.
参考质量标准
外观:白色粉末
纯度(HPLC) ≥98.0%
醋酸根含量≤12.0%
水分含量≤8.0%
肽含量≥80.0%
内毒素≤50EU/mg
氨基酸组成分析≤±10%
安全信息
WGK Germany | 3 |
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MSDS信息
提供商 | 语言 |
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SigmaAldrich | 英文 |