Elisa代测

♦ 服务介绍

       酶联免疫(ELISA)，利用抗原与抗体的特异性反应将待测物与酶连接，然后TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。根据颜色反应定量目标抗原或抗体含量。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

♦ 实验流程

       试剂盒：以实际试剂盒品牌为准

　　实验流程(具体步骤以说明书为准):

　　1.样本准备：血清、血浆、组织匀浆、细胞上清;

　　2.操作步骤：处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—洗板，加检测抗体溶液，孵育—洗板，加酶溶液，孵育— 洗板，加TMB底物— 加终止液50ul，立即450nm读数(双抗夹心法)

　　处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—加酶溶液—加检测抗体— 混匀孵育— 洗板，加TMB显色— 加终止液50ul，立即450nm读数(竞争法)

　　3.实验结果：有样本OD值代入标曲中计算出浓度，结果以EXCEL形式发出。

♦ 送样运输要求

      1、动植物组织样本(干冰运输)

　　准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

　　2、血清样本(干冰运输)

　　全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

　　3、血浆样本(干冰运输)

　　可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

　　4、细胞样本

　　贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

　　悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

　　细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。