024045 胰蛋白月示-亚硫酸盐-琼脂培养基

　　(Tryptose Sulfite Agar)

　　用 途：

　　用于城市供水中滤膜法测定亚硫酸盐还原厌氧菌(梭状芽孢杆菌)孢子。(中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/T 149—2001)

　　原 理：

　　胰蛋白胨、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵为硫化氢指示剂;梭状芽孢杆菌将焦亚硫酸钠还原为硫化氢，与铁离子结果形成黑色沉淀。

　　培养基配方(每升)：

　　胰蛋白月示 15g

　　大豆蛋白胨 5g

　　酵母膏粉 5g

　　焦亚硫酸钠(Na2S2O5) 1g

　　柠檬酸铁铵 1g

　　琼脂 15g

　　最终pH7.6±0.2

　　使用方法：

　　1、称取本品42g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃灭菌15分钟，待冷至50℃左右倾注平皿。

　　2、滤膜灭菌

　　将滤膜放入烧杯中，置于沸水中煮沸灭菌三次，每次15分钟。前两次煮沸后需要更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。

　　3、滤器灭菌

　　视滤器质地采用干热(酒精棉球火焰)或湿热灭菌。

　　4、孢子的选择

　　水样在试验前须放置于水浴锅中，75±1℃加热15分钟。用同样的水样瓶作空白，用温度计检查加热温度。

　　5、接种与培养

　　水样的过滤量要适当：对于饮用水、泉水、井水、海水、地面水和梭状芽孢杆菌轻度污染的水，取100mL过滤;对污染严重的水或废水，可用无菌水稀释后检测。调配一定的稀释度，使在滤膜上生长的黑色菌落分离，而更易于计数。

　　水样过滤后，用无菌镊子将滤膜过滤面朝下，置于培养皿中，同时使滤膜下无气泡。小心地将18mL约50℃的培养基倾注于培养皿中的膜上。在形成培养基层后，37±1℃培养20±4h和44±4h。如果使用厌氧培养箱，滤膜可放置在琼脂面上，且滤膜面向上。

　　6、观察结果。

　　培养20±4h和44±4h后，计数所有黑色菌落。

　　7、分析结果的表述

　　试验报告应说明所使用的方法，单位体积水样中亚硫酸盐还原厌氧细菌培养44±4h的孢子;孢子数太多，黑色菌落连在一起而难以计数，可采用20±4h培养时间的孢子大约数目。结果以CFU/100mL计。

　　质量控制：

　　质控菌株接种后于37±1℃培养24—48h，结果如下：

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：250g

　　参考文献:

　　1. CJ/T 149—2001中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水水质检验方法