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产品简介

Elabscience^®自主研发的Annexin V-AF647染色液用于鉴定凋亡和坏死细胞。

Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记荧光染料AF647利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。

Annexin V搭配PI或7-AAD、DAPI等DNA染色液使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。

试剂组成

本试剂搭配DAPI检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：

Jurkat细胞用5 μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h，本试剂搭配DAPI染色后，流式细胞仪荧光检测。Annexin V-AF647单阳细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-AF647和DAPI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，DAPI单阳细胞为裸核细胞。

实验步骤

1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。
注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。

2. 取1~5 × 105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。

3. 细胞悬液中加入5 μL的Annexin V-AF647染色液和5 μL的细胞核DNA染色液。

4. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。

5. 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

保存条件

2~8°C可保存1年。Annexin V-AF647染色液需要避光保存。

注意事项

1.保质期1年，为获得最佳使用效果，请在3~6个月内使用，Annexin V-AF647禁止冷冻保存。

2.染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

3.荧光物质均易发生淬灭，进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，操作和存放过程尽量注意避光保存。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。