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Product Brief
原理说明:正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡细胞中,PS会从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。因此将Annexin-V与PI结合使用,就可以检测出细胞群体中的早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞。
试剂盒组分:
组分
MK1028-20
(20次实验)MK1028-50
(50次实验)MK1028-100
(100次实验)Annexin V-FITC
100μl
250μl
500μl
Propidium Iodide(PI)
100μl
250μl
500μl
Binding Buffer
10ml
25ml
50ml
使用方法:注意事项:
实验参考:
凋亡诱导剂处理JK细胞,37℃,5%CO2培养4h,参照说明书操作,经流式细胞仪检测结果如下:
处理前 :正常细胞占比较高,早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞较少。
(红色部分为正常细胞,蓝色为早期凋亡细胞,绿色为晚期凋亡细胞,品红色为坏死细胞 )
处理后:正常细胞明显减少,早期凋亡细胞明显增加 。
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<img onclick="xshow(this)" src="http://img.lianshimall.com/statics/attachment/goods/pl20151218/boshide/MK1028.jpg" alt="Jurkat细胞 Annexin V-FITC PI凋亡试剂盒(MK1028),流式细胞仪检测" />
Jurkat细胞 Annexin V-FITC PI凋亡试剂盒(MK1028),流式细胞仪检测
1. Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前离心集液。
2. Annexin V-FITC与PI需低温避光储存。
3. PI有毒,能透过皮肤进入体内,使用时注意必要防护。
4. 本试剂盒适用于细胞样本,不适用于组织检测。
5. 检测细胞不能固定。
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
Instructions
此试剂盒包含ANNEXIN V-FITC 及PI两种主要试剂,另含有结合缓冲液,主要针对细胞凋亡的检测。