产品简介：

    过氧化氢检测试剂盒(Hydrogen Peroxide Assay Kit)可以用于培养细胞或组织内过氧化氢水平的测
定，也可以用于培养细胞的上清或血清、尿液、血浆或其它生物体液中的过氧化氢浓度的测定。
    过氧化氢是一种活性氧代谢的副产物，在许多氧化应急反应中过氧化氢都是一种关键的调节因子。过氧化氢可以激活NF-κB等因子，这些过氧化氢相关的信号途径和哮喘、炎症性关节炎、动脉硬化以及神经退行性疾病等许多疾病相关。过氧化氢也和细胞凋亡、细胞增殖等密切相关。
    本试剂盒通过过氧化氢氧化二价铁离子产生三价铁离子，然后和xylenol orange在特定的溶液中形成紫色的产物，从而实现对过氧化氢浓度的测定。本试剂盒经过改良配方，可以检测低达1微摩尔/升的过氧化氢。
    本试剂盒方便快捷，通常10-20个样品可以在40-60分钟内测定完毕。
    本试剂盒可以检测150个样品。
包装清单：

保存条件：
    -20℃保存，一年有效。其中过氧化氢标准溶液需避光保存。
注意事项：
    一些干扰氧化还原的试剂或在酸性条件下呈紫色或接近的试剂会对过氧化氢的检测产生干扰，需尽量避免。
    如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐，会干扰测定。但普通培养基、血清等样品中含有的微量的铁盐不会干扰测定。
    所测得的标准曲线尽管在一定的浓度范围内接近直线，但整个标准曲线不是直线。
    测定时需可以测定A560的酶标仪一台(测540-570nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

使用说明：
1. 样品测定的准备：
    (1)细胞或组织样品的制备
    对于培养的细胞，先收集细胞到离心管内，弃上清，按照每100万细胞加入100-200微升过氧化氢检
    测裂解液的比例加入裂解液，随后充分匀浆以破碎并裂解细胞。4℃约12000g离心3-5分钟，取上
    清，用于后续测定。组织样品按照每5-10mg组织加入100-200微升裂解液的比例进行匀浆。4℃约
    12000g离心3-5分钟，取上清用于后续测定。以上所有操作均需在4℃或冰上操作。制备好的细胞或
    组织样品如果不立即测定，可以-20℃冻存。
    (2)培养细胞上清液样品的制备
    培养细胞的上清液可以直接用于后续的测定。
    (3)血清、血浆或尿液样品的准备：
    配制50mM磷酸缓冲液，pH为6.0。用pH为6.0的50mM磷酸缓冲液把样品稀释50倍。例如4微升样品稀释
    到196微升pH为6.0的50mM磷酸缓冲液中。稀释后即可用于后续的测定。
2. 标准曲线测定的准备：
    (1)过氧化氢标准品的校准：
   由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度以进行校准。把浓度约为1M的
    过氧化氢用水稀释100倍，使过氧化氢的浓度约为10mM，测定A₂₄₀。
    过氧化氢浓度(mM)=22.94 X A₂₄₀
   从而计算出本试剂盒提供的过氧化氢的实际浓度，并根据实际测定出来的浓度进行后续的标准曲线
    的设置。
    (2) 标准曲线的设置：
    样品在什么溶液中标准品也需用什么溶液稀释，这样可以减小误差。例如对于细胞样品，标准品宜
    用过氧化氢检测裂解液稀释，对于培养细胞的上清液样品，标准品宜用相应的细胞培养液稀释。标
    准溶液可以稀释成1、3、10、30、100微摩尔/升，或1、2、5、10、20、50、100微摩尔/升，初次测
    定后知道样品的浓度范围后可以对标准品在样品浓度范围附近密集测定。
3. 过氧化氢浓度的测定：
    (1)把过氧化氢检测试剂在冰上或冰水浴上融解。
    (2)在检测孔或检测管内加入50微升样品或标准品。
    (3)在每个孔内加入100微升过氧化氢检测试剂。
    (4)轻轻振荡或敲打混匀，室温(15-30℃)放置30分钟。然后立即测定A560。如测A560有困难，波长
       可以选择540-570nm。
    (5)根据标准曲线计算出样品中过氧化氢的浓度。
     注意：如果样品中过氧化氢的浓度过高，可以适当稀释后再测定。如果样品中过氧化氢的浓度过
    低，可以把样品的体积改为使用100微升，同时标准品也使用100微升，而检测试剂仍然使用100微
    升。这样可以提高检测的灵敏度，但缺点是样品需要消耗100微升。