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• 针对种属：mouse

• 质粒由来源于 GeCKO (v2)库的ephrin-B320 nt向导RNA组成。

• 向导RNA指导Cas9蛋白去诱导基因组DNA中的位点专一的双链破裂（DSB）

• 基因的敲除或者激活可以使用 ephrin-B3 Antibody (D-11): sc-390696分析

• 除慢病毒激活颗粒外，其他产品均为转染即用型纯化DNA质粒。慢病毒激活颗粒预包被成慢病毒颗粒的形式，适用于难被转染的细胞

CRISPR/Cas9 KO Plasmid

Description
 

• 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染

• 为保证最大敲除效率，ephrin-B3 CRISPR/Cas9 敲除质粒 (m) 包含三个质粒，每个质粒都编码Cas9 核酶和 ephrin-B3-特异性20nt向导RNA.

• gRNA 序列来源于 GeCKO (v2)文库，指导Cas9蛋白去诱导基因组DNA双链中一个特异位点的断裂。

• 如果需要筛选Cas9成功诱导双链断裂的细胞，推荐用 ephrin-B3 HDR质粒(m) (sc-420126-HDR) 共转染。

• 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ephrin-B3: sc-390696，通过WB, IF或者IHC分析

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HDR Plasmid

Description
 

• 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染

• 推荐用 ephrin-B3 HDR 质粒 (m) 和 ephrin-B3 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) CRISPR/Cas9敲除质粒共转染 (m)

• ephrin-B3 HDR 质粒 (m) 包含2-3种质粒，每一种都含有一个同源介导的双链DNA修复（HDR）模板，与 ephrin-B3 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 的剪切位点相对应

• 每个HDR质粒包含两个800个bp同源臂，可特异地结合到相应的Cas9诱导的双链DNA破坏位点附近的基因组DNA

• 每个HDR质粒中嵌入了一个嘌呤霉素抗性基因，从而能筛选出稳定敲除（KO）细胞，以及一个RFP（红色荧光蛋白）基因，可用于观察验证转染情况

• 嘌呤霉素抗性基因和红色荧光蛋白基因的两侧是两个LoxP位点，以便与接下来的Cre Vector sc-418923处理

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Double Nickase Plasmids

Description
 

• 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染

• ephrin-B3 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的ephrin-B3 CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性

• 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割

• 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记

• ephrin-B3双切口酶质粒(m2)编码的成对的向导RNA与ephrin-B3双切口酶质粒(m)的编码的向导RNA不同

• 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ephrin-B3: sc-390696，通过WB, IF或者IHC分析

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CRISPR Activation Plasmids

Description
 

• 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染

• ephrin-B3 CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达

• ephrin-B3 CRISPR激活质粒（m）包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64和杀稻瘟菌素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白和潮霉素抗性基因；一种质粒编码目标特定的20 nt向导RNA和嘌呤霉素抗性基因

• 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募

• ephrin-B3 CRISPR激活质粒（m2）中编码特异目标的 20 nt 向导RNA的单链 gRNA (MS2) 质粒不同于ephrin-B3CRISPR激活质粒(m）的gRNA

• 转染后，基因激活效率可以用抗体：ephrin-B3 Antibody (D-11): sc-390696，通过WB、IF或IHC分析

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Lentiviral Activation Particles

Description
 

• 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子

• ephrin-B3 慢病毒激活颗粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，通过细胞慢病毒转导，特异高效地上调目的基因的表达

• ephrin-B3慢病毒激活颗粒(m)包含以下SAM激活元素：一种是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64；一种是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一种是目标特定的20 nt向导RNA。它们还含有杀稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因

• 一经转导，形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因，招募转录因子

• ephrin-B3 慢病毒激活颗粒（m2）中编码的特异目标的 20 nt 向导RNA的gRNA不同于ephrin-B3慢病毒激活颗粒（m）中编码的gRNA

• 转染后，基因激活效率可以用抗体：ephrin-B3 Antibody (D-11): sc-390696，通过WB、IF或IHC分析

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