详细说明
-
- 针对种属：mouse
- 质粒由来源于 GeCKO (v2)库的D11Wsu47e20 nt向导RNA组成。
- 向导RNA指导Cas9蛋白去诱导基因组DNA中的位点专一的双链破裂（DSB）
- 除慢病毒激活颗粒外，其他产品均为转染即用型纯化DNA质粒。慢病毒激活颗粒预包被成慢病毒颗粒的形式，适用于难被转染的细胞
Description
See Protocol Online.
HDR Plasmid- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- 为保证最大敲除效率，D11Wsu47e CRISPR/Cas9 敲除质粒 (m) 包含三个质粒，每个质粒都编码Cas9 核酶和 D11Wsu47e-特异性20nt向导RNA.
- gRNA 序列来源于 GeCKO (v2)文库，指导Cas9蛋白去诱导基因组DNA双链中一个特异位点的断裂。
- 如果需要筛选Cas9成功诱导双链断裂的细胞，推荐用 D11Wsu47e HDR质粒(m) (sc-435479-HDR) 共转染。
- 关于对照抗体的可用性，请联系技术服务
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
Double Nickase Plasmids- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- 推荐用 D11Wsu47e HDR 质粒 (m) 和 D11Wsu47e CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) CRISPR/Cas9敲除质粒共转染 (m)
- D11Wsu47e HDR 质粒 (m) 包含2-3种质粒，每一种都含有一个同源介导的双链DNA修复（HDR）模板，与 D11Wsu47e CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 的剪切位点相对应
- 每个HDR质粒包含两个800个bp同源臂，可特异地结合到相应的Cas9诱导的双链DNA破坏位点附近的基因组DNA
- 每个HDR质粒中嵌入了一个嘌呤霉素抗性基因，从而能筛选出稳定敲除（KO）细胞，以及一个RFP（红色荧光蛋白）基因，可用于观察验证转染情况
- 嘌呤霉素抗性基因和红色荧光蛋白基因的两侧是两个LoxP位点，以便与接下来的Cre Vector sc-418923处理
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
CRISPR Activation Plasmids- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- D11Wsu47e 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的D11Wsu47e CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- D11Wsu47e双切口酶质粒(m2)编码的成对的向导RNA与D11Wsu47e双切口酶质粒(m)的编码的向导RNA不同
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
Lentiviral Activation Particles- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- D11Wsu47e CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- D11Wsu47e CRISPR激活质粒（m）包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64和杀稻瘟菌素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白和潮霉素抗性基因；一种质粒编码目标特定的20 nt向导RNA和嘌呤霉素抗性基因
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- D11Wsu47e CRISPR激活质粒（m2）中编码特异目标的 20 nt 向导RNA的单链 gRNA (MS2) 质粒不同于D11Wsu47eCRISPR激活质粒(m）的gRNA
- 转染后，基因敲除效率可用抗体通过WB, IF或者IHC分析: ?:
See Protocol Online.
Description
See Protocol Online.
- 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子
- D11Wsu47e 慢病毒激活颗粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，通过细胞慢病毒转导，特异高效地上调目的基因的表达
- D11Wsu47e慢病毒激活颗粒(m)包含以下SAM激活元素：一种是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64；一种是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一种是目标特定的20 nt向导RNA。它们还含有杀稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因
- 一经转导，形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因，招募转录因子
- D11Wsu47e 慢病毒激活颗粒（m2）中编码的特异目标的 20 nt 向导RNA的gRNA不同于D11Wsu47e慢病毒激活颗粒（m）中编码的gRNA
See Protocol Online.
4006226992