高分辨可视化单分子操纵的荧光显微镜光镊

微信扫码

我们的用户：* 阿姆斯特丹自由大学
* 国际生物技术和生物医学中心（BIOCEV）
* 洛克菲勒大学
* 格罗宁根大学
* 荷兰FOM研究所
* 约翰斯霍普金斯大学
* 格廷根大学
* 上海科技大学
* 伯克利大学
* 哈佛大学

发表文献代表：Science,2016；NatureCommunications,2016；

应用案例：

*分子间相互作用--DNA与蛋白质相互作用

下图显示了随着时间（水平）DNA结合的花青染料Sytox-Orange（DNA嵌入剂）的位置（垂直）。波动曲线显示了XRCC4和XLF的位置（垂直），两个修复蛋白在非同源末端接合，随着时间的推移结合到DNA（水平）。这个图显示了XRCC4(绿，9%)，XLF(红，62%)和XRCC4-XLF复合物的动态变化。这个波动曲线提供了在DNA修复过程中实时了解DNA-蛋白质的相互作用和蛋白质和蛋白质相互作用

*力学测量--蛋白质结构域的展开

   下图一显示了两个光学捕获的珠粒之间的蛋白质。通过同时拉伸蛋白质并测量力和距离，可以获得力-伸展曲线。得到的力-距离曲线表明了蛋白质的展开分为三步，对应着三个独立的蛋白质域。通过观察特定标记区域的FRET荧光信号，有可能研究在由于在相对的位置的变化引起的FRET信号波动蛋白质域的展开。这样可以将整个蛋白质的机械性能与局部结构性能联系在一起。
   由于C-Trap（高达50kHz帧率）的高时间分辨率，可以显示出显示短生命结构中间状态之间转换的平衡动力学。测量平衡动力学的这种能力归因于固有距离夹具，其将珠保持在固定距离，同时测量力波动。当该测量应用于钙调蛋白时，可以通过力分辨率低于0.1pN观察到状态之间的精确平衡波动和相对概率。
   下图二显示，钙调蛋白在两种状态之间切换，没有明确的偏好，中间步骤可以解决，因为钙调蛋白偶尔在短时间内跳到第三种状态。