实验技术服务-细胞凋亡检测
实验原理
细胞凋亡(Cell apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用,它并不是病理条件下的损伤,而是为更好地适应生存环境而主动发生的一种死亡过程。
细胞凋亡检测的方法很多,我们采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,其原理是:磷脂酰丝氨酸(Phosphatidyl serine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行EGFP融合、荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针检测PS的外翻。。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死和凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胞区分开来。
实验流程
实验结果
细胞凋亡检测,细胞凋亡检测
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