CRISPR/Cas9 基因敲除细胞株（单克隆，鉴定）

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       CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上，sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合，Cas9切割靶标序列产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复，通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接（NHEJ：nonhomologous DNA end joining）的方式对断裂的双链进行修复，从而造成靶位点基因的插入或缺失突变，发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。

CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破，具有操作简便，周期短，敲除效率高，作用靶点多，无基因、细胞及物种限制，目的基因的大小不受限制，不受转录本数量影响等优势，逐渐成为基因敲除的标准操作工具。

 

1、针对敲除目的基因设计合适的靶点，构建3个CRISPR/Cas9敲除质粒并测序验证。
2、分别将3个CRISPR/Cas9敲除质粒转染293T细胞，利用T7EⅠ试验筛选出编辑效率最高的CRISPR/Cas9敲除质粒。
3、用编辑效率最高的CRISPR/Cas9敲除质粒包装慢病毒，并且检测慢病毒的滴度。
4、用慢病毒感染目的细胞，抗性筛选获得CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株。
5、CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株测序检测。

 

1、待敲除目的基因的名称和编号(gene ID)。
2、需构建敲除株的细胞信息。

1. CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞。
2. CRISPR/Cas9敲除质粒。

3. CRISPR/Cas9敲除质粒的序列，酶切鉴定、测序结果。

4. T7EⅠ试验检测结果。

5. CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株测序检测结果。

6. 说明实验过程中所用的耗材、仪器设备和操作过程的实验报告一份。
 

服务周期：3-4个月。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途