细胞实时动态成像分析

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长时间细胞动态成像及数据分析系统

IncuCyte Zoom：第二代长时间动态活细胞成像及数据分析系统

　　目前，大部分的细胞检测方法采用的仍然是传统的终点法——给出终结果，而且往往需要标记细胞和破坏细胞。这种方法无法得到细胞在生长时的真正状态，也无法对细胞的生长过程做出动态的监测和分析。美国Essen公司开发了第二代长时间实时动态活细胞成像分析仪——IncuCyte Zoom，用一种非侵入式的方法，记录细胞的实时生长状态。这种成像方法，被称为“实时细胞内涵成像”（Live Content Imaging），扩充了用户记录和理解细胞生长、细胞行为和细胞形态的途径。
IncuCyte Zoom是一套用于非伤害的、长时间实时动态的活细胞成像分析平台。IncuCyte分为信号采集机和控制机两部分，信号采集机可放置于培养箱中，中间放置多种规格尺寸的板、皿、瓶及载玻片，在其下方有显微照相设备，通过显微拍照，对培养细胞进行连续的监测，并通过联网的电脑进行远程控制、数据读取与分析。系统可自动收集每个时间点的相差图像和红/绿荧光图像。用户除了可以得到各种格式的图像或动态录像外，还可以得到由系统软件自动依据饱和度和计数分析生成的基于图像应用的图表，以显示细胞的变化及趋势。如显示细胞增殖的饱和度vs时间图表，显示经生长的经突长度vs时间图表，显示Wound Healing实验的相对伤口密度vs时间图表，或显示血管的血管长度vs时间图表。
IncuCyte的优势：1）培养的细胞用高清晰度相差显微镜或荧光显微镜直接监测，为非破坏性的监测，细胞不用染色便可以观察监测，影像；2）监测过程中细胞无需离开培养箱，不用担心培养条件的改变对细胞的影响；3）真正的长时间的动态活细胞成像，可达数天或数月，高清晰度相差成像能消除微孔板的弯液面缺陷（meniscus artifacts），且没有传统显微系统的光晕问题，可以在384微孔板内监测细胞形态；4）图像处理软件自动依据饱和度和计数分析，量化细胞增殖；5）自动输出细胞生长曲线和细胞生长录像；6）实时监控，可改变传统的“终点法”实验方法，数据丰富，更准确、更灵活；7）高通量，可同时监测6块标准规格的细胞培养板/皿/瓶/载玻片，包括96-孔微孔板和384-孔微孔板，细胞在384-孔微孔板内实验，可以减少宝贵的药品消耗；8）支持过200种的标准培养容器，无需的培养容器，节约后期实验成本；9）可远程监控，进行数据读取和分析，无需反复出入细胞房，避免了潜在的污染隐患及人工出入观测之麻烦。

不同浓度十字孢碱对 A549 球体生长的影响 

（十） T 细胞免疫杀伤

应用IncuCyte ZOOM用于研究T细胞免疫杀伤细胞的全过程和特异性，无需lift细胞或者使用Ab标记或放射性同位素方法。此外高清晰度图像和动态影像可以很清楚的了解T细胞杀伤过程中潜在的生物学过程。

anti-CD3 和 IL-2 杀伤 SKOV3 NucLight Red? cells(2K/well) 与 PBMC’s  (20K/well) 混合培养过程 图（已加入 caspase 3/7 试剂）

IncuCyte Zoom的应用总结：
1）监测细胞增殖（Proliferation）：通过实时动态成像，对细胞增殖进行非侵入性的、定量的分析；
2）细胞培养质控（Cell Culture QC）/细胞培养优化（Cell Culture Optimization）：通过实时动态成像，可生成基于细胞饱和度的动态生长曲线；
3）监测细胞毒性（Cytotoxicity）：将染料和细胞混合然后读数，操作者可离开，是基于染料的实验；
4）监测细胞凋亡（Apoptosis）：将凋亡试剂和细胞混合然后读数，操作者可离开，是基于染料的实验；
5）监测细胞迁移（Cell Migration）/细胞侵袭（Cell Invasion）：配套高度一致性的96孔伤口划痕工具，实时动态监测伤口的愈合过程，可得到细胞运动的定量指标；
6）监测血管（Angiogenesis）：使用通过验证的血管试剂盒，具有动态分析血管的定量指标；
7）监测基因（Reporter Gene）：细胞无需裂解，可获得实时动态数据；
8）经生长跟踪（Kinetic NeuroTrack）：可定量分析经元细胞的经突的生长状况。
9）3D球体观察（3D Spheroid）：可自动计算3D球体的生长和收缩，实时动态地定量球体参数（如尺寸和荧光度）。
10）T细胞免疫杀伤： 用于研究 T 细胞免疫杀伤细胞的全过程和特异性，无需 lift 细胞或者使用 Ab 标记或放射性同位素方法。